Öva god pipetteringsteknik

Se till att du känner till hur man pipettera redigt.

De viktigaste reglerna att följa är:

Pipettera med en maklig, mjuk rörelse Håll pipetten vertikalt när man drar upp fluid
Bara doppa spetsen något vid tömning utav vätska – eljest kommer du belägga utsidan av spetsen med fluid, som kommer att överföras tillsammans med volymen därinnanför pipetten.
När dosering utav vätskan, håll pipetten vertikalt men hålla sidoväggen det mottagande kärlet i 45 grader.
Pipettera mot sidoväggen alternativt i vätskan som allaredan är vari.

Testa hurdan bra man är.

Avsyna riktigheten av din pipettering igenom dispensering 100 mikroliter på en fin våg.
Massan utav droppen du gör borde vara cirka 0, 1 g.
Tillverkar idag detsamma 10 gånger och anteckna massorna man får.
Om variationen är mesta än / – 0, 5% måste du antingen byta ut pipett eller så du ska man öva mer!

Vet knepen som ökar din grundlighet

Förvätning.

När du tömmer vätska från pipetten så finns en beläggning av är kvar på bra, vilket tillverkar tömda volymen något kortare tid än den bör vara.
Förvätning av spetsen före du pipetterar avhjälper detta.
Bara dra opp vätskan i din pipett samt töm den sedan tillbaka till den ursprungliga kärlet.
Beläggningen är nu på bra så när man nu avvika upp vätskan åter och fördela det i det mottagande kärlet, kommer noll utav den ta vägen förlorad mot vätning.
Detta rekommenderas endast för större volymer än 10 mikroliter.

Omvänd pipettering är en bäst teknik för pipettering utav viskösa vätskor eller flyktiga lösningsmedel.
Tryck kolven ner till utrensningsläge (den andra hållplatsen) och avvika opp vätskan.
Det finns alltför mycket vätska i spetsen vid denna punkt, men när vätskan töms genom att trycka kolven till den aspirationsposition (första stoppet), är den tillägg vätskan kvar i spetsen.
Med denna förfarande är spetsen “automatiskt” i förväg vätt men den mer vätskan stöder också vid pipettering flyktiga lösningsmedel alldenstund en del av lösningsmedlet kommer att tendera att dunsta bort till luftkudden.

Ta omgivningstemperaturen i hänsyn.

Din pipett har kalibrerats vid rumsvärme.
Om man jobbar vid en annan värme (t. ex. i ett kyligt rum) kommer din pipett ej att fördela de visade volymerna.

Ta provtemperaturen i beaktande.

I en härförleden Nature Methods publicering, observerade Millet samt Barthlen ett märkligt fenomen att när de behövde pipettera kalla prover, den första dispenserade volymen var alltid är mesta än väntat, men efterföljande pipettering med samma tagg gav korrekt volym.
Detsamma gällde för varma tester, bortsett från att den första dispenserade volymen var mindre än väntat.
Deras lösning var enkel – dosera den första volymen tillbaka till den ursprungliga kärlet, sedan börja pipettering.

Begagna en förnuftig pipett för den volym du önskar inneha. Riktigheten i din pipett minskar när dispenserade volymen närmar sej minsta pipetten kan hantera.
Så för dispensering 15 mikroliter, exempelvis, skulle en 1 ml pipett vara hemskt, en 200 mikroliterpipett ej så bäst samt 20 mikroliterpipett ideal.

Använd den största möjliga volym.

Stora volymer är lättare att pipettera noggrant än små.
Säg att du utför en analys vari man måste noggrant pipettera 5 mikroliter.
Pipettering 5 mikroliter absolut är ej lätt och kommer antagligen i hög grad tillföra statistiska fel i dina konklusion.
Däremot, om du utspäder förrådslösningen 10 gånger och pipetterade 50 mikroliter, skulle detta vara mycket mer exakt, som ger dej mycket snävare felstaplar.

Samt till slut, så här gör du för tillgängliga maximalt noggrannhet.

En analysvåg är mer absolut än någon pipett.
För maximal grundlighet, begagnad din pipett för att mäta upp den volym du ska, men gör det i en tarerad behållare på en våg.
Sedan beräknar du det verkliga pipetterade volymen från massa (volym = massa / densitet).
Givetvis funkar detta endast för lösningar av bekant densitet – men för vattenlösningar, som har en densitet utav 1, är detta ej ett bekymmer.